domingo, 25 de septiembre de 2016

articulo revista cubana de higiene y epidemiologia

Revista Cubana de Higiene y Epidemiología

versión On-line ISSN 1561-3003

Rev Cubana Hig Epidemiol v.35 n.1 Ciudad de la Habana ene.-abr. 1997

 

Instituto Nacional de Higiene, Epidemiología y Microbiología

Evaluación de la efectividad del producto furfural como posible desinfectante

Ing. Miriam Concepción Rojas,1 Lic. Miriam Martínez Varona2 y Téc. Miriam Beades Quintana3

RESUMEN

    Se realizó un estudio de la efectividad antimicrobiana del producto furfural como posible desinfectante, para su evaluación se utilizó la metodología CAME. Se aplicó el producto en solución alcohólica a concentraciones de 0,1; 0,3; y 0,5 % frente a los gérmenes de referencia y se obtuvo buena efectividad al minuto de aplicado. La prueba de irritabilidad dérmica y oftálmica arrojó que el producto es ligeramente irritante para vía cutánea y mucosas, por lo que no debe ser utilizado como desinfectante, ni para la antisepsia de las manos y la piel.
    Descriptores DeCS: FURALDEHIDO/farmacología; DESINFECTANTES; CONEJOS; PIEL/efectos de drogas; OJOS/efectos de drogas; SELECCION DE MEDICAMENTOS; ESCHERICHIA COLI/efectos de drogas; STAPHYLOCOCCUS AUREUS/efectos de drogas; PSEUDOMONAS AERUGINOSA/efectos de drogas; EFECTIVIDAD.
Los factores condicionales que se deben tener en cuenta para ejecutar un sistema amplio de control de las infecciones hospitalarias son múltiples, y dentro de este ámbito es de suma importancia un programa de vigilancia que tenga en cuenta los procesos de desinfección y esterilización.1,2
Se señala la capacidad de los microorganismos del ambiente hospitalario de crear resistencia a agentes bactericidas o bacteriostáticos como los antibióticos y desinfectantes químicos, por lo que es necesario estudiar la resistencia o susceptibilidad con la utilización de métodos que determinen también la resistencia o susceptibilidad variable a estos agentes debido a mecanismos de resistencia bacteriana.3,4
Para dar respuesta a la problemática existente con la escasez de productos para ser utilizados en la desinfección hospitalaria,5 nos dimos a la tarea de buscar alternativas en diferentes organismos productores de sustancias o preparados que pudieran sustituir este déficit. Con este fin, recibimos del Instituto Cubano de Investigación de Derivados de la Caña de Azúcar (ICIDCA), el furfural, producto químico obtenido de la hidrólisis ácida del bagazo de caña. Este producto es incoloro y se oscurece al contacto con la luz o el aire, es de olor penetrante, soluble en agua y alcohol e inflamable.6
En tal sentido nos trazamos como objetivos: evaluar la efectividad antimicrobiana del producto furfural como posible desinfectante, elaborar los regímenes de desinfección y evaluar la irritabilidad dérmica y oftálmica, así como la eficacia del producto en condiciones prácticas.

MÉTODOS

Nuestro universo estuvo constituido por muestras del producto furfural a las cuales se les evaluó la actividad antimicrobiana in vitro según la metodología CAME,7 la cual incluye los pasos siguientes:
  1. Estudio de las propiedades antimicrobianas. Para este estudio se ensayó la prueba de dilución, la prueba de suspensión cualitativa, la prueba de suspensión cuantitativa y la prueba de portagérmenes, según elManual de Normas Técnicas del Laboratorio de Desinfección.8
  2. IEstudio de algunas propiedades químicas y toxicológicas. Se realizó la prueba de estabilidad, consistente en el estudio de algunas propiedades químicas, según lo descrito en el Manual de Normas Técnicas para el control químico de desinfectantes.9 En el estudio toxicológico aplicamos la prueba de irritabilidad dérmica y oftálmica,10,11 se utilizaron conejos albinos y se clasificaron, de acuerdo con la escala establecida:
0 = No irritante (NI).
0-2 = Ligeramente irritante(LI).
2-5 = Moderadamente irritante (MI).
Más de 5 = Severamente irritante (SI).
  1. Elaboración de los regímenes de desinfección. En este estudio se utilizó la prueba de superficies y la prueba de instrumentos, según lo establecido en el Manual de Normas Técnicas del Laboratorio de Desinfección.8
Para la preparación de la suspensión bacteriana se utilizaron las cepas de referencia Escherichia coli ATCC 536, Staphylococcus aureus ATCC 144 y Pseudomonas aeruginosa de gran patrón de resistencia, todas a una concentración de 109 unidades formadoras de colonias (UFC) x mL. Se utilizó suero humano inactivado como neutralizante universal.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

La prueba de instrumentos se calculó según la siguiente ecuación:
      n - m  Mp = -------           n
M = valor medio
p = tanto por ciento de descontaminación (frecuencia de aparición de los sucesos sometidos a la distribución binominal)
n = número general de determinaciones
m = cantidad de resultados negativos
En la prueba de superficies se trabajó con la media aritmética y se aplicó:
     S xi       i=1  M = ------        n
M = media aritmética
Xi = UFC aisladas/mL
i = determinaciones
n = número de observaciones

RESULTADOS

En la prueba de dilución se aprecia que el producto en solución alcohólica a 95, 75 y 40° tiene la máxima efectividad, frente a los 3 gérmenes de prueba.
En la prueba de suspensión cualitativa se observa que en solución alcohólica a 95 y 400 a las concentraciones 0,1; 0,3 y 0,5 % se obtienen resultados satisfactorios al minuto de aplicado. Se obtiene buena efectividad cuando se realiza a la concentración de trabajo.
En la prueba de portagérmenes el producto se estudia a la concentración de trabajo, se aprecia que frente a los 3 gérmenes de prueba y a los 8 min de aplicado, tiene buena efectividad.
En la prueba de suspensión cuantitativa, el producto a la concentración de trabajo frente a los 3 gérmenes de prueba y en un gradiente de tiempo 1, 3 y 5 min, no fue efectivo.
El estudio toxicológico arrojó los siguientes resultados:
Ingestión    2   Inhalación   2   Cutánea      3   Mucosas      3
En la prueba de superficies a la concentración de trabajo, frente a los 3 gérmenes de referencia y en un gradiente de tiempo de hasta 2h, el producto no fue efectivo.
En la prueba de instrumentos a la concentración de trabajo, frente a los 3 gérmenes de referencia y a las 2h de contacto, el producto no fue efectivo.

DISCUSIÓN

En la prueba de dilución el producto se trabajó puro, fue efectivo a concentraciones muy bajas (0,38 - 0,78 %) frente a Escheria coli y Staphylococcus aureus, mientras que para Pseudomonas aeruginosa la concentración fue de 0,78-1,36 %. Al continuar el estudio se comprobó que cuando se trabajaba en soluciones acuosas dentro del rango de concentraciones efectivas, no se obtenían buenos resultados. Se comenzó el estudio del producto en soluciones alcohólicas a diferentes grados (95, 75 y 40°) y se obtiene la máxima efectividad del producto, independientemente del grado alcohólico en que se disolviera frente a los 3 gérmenes de prueba.
En la prueba de suspensión cuantitativa se trabajó en solución acuosa a diferentes concentraciones sin obtener resultados efectivos. En solución alcohólica se estudió (95 y 40°) en las concentraciones de 0,1; 0,3 y 0,5 %, y se obtuvieron resultados satisfactorios al minuto de aplicado.
Posteriormente se ensayó a la siguiente concentración: 5 mL de furfural, 20 mL de alcohol de 400 y 75 mL de agua destilada, se obtuvo buena efectividad y se designó como concentración de trabajo.
En la prueba de portagérmenes el producto se estudió a las concentraciones 0,2 y 0,5 % en solución alcohólica (95, 70 y 400), y se obtuvieron buenos resultados. Posteriormente se trabajó a la concentración de trabajo, donde se obtuvo buena efectividad frente a los 3 gérmenes de estudio, a los 8 min de aplicado.
En la prueba de suspensión cuantitativa, el producto se ensayó a la concentración de trabajo frente a los 3 gérmenes de prueba, en un gradiente de tiempo de 1, 3 y 5 min, se obtuvo que, en ese gradiente, la efectividad no fue buena.
En la prueba de desinfección de superficies, se utilizaron como superficies de estudio muestras de azulejo, cristal, plástico y metal; después de un tiempo de contacto de 2 h con el producto a la concentración de trabajo, el resultado no fue efectivo.
En la prueba de desinfección de instrumentos se utilizaron como instrumentos de estudio muestras de tramos de goma, metal, tornillos y perlas, y durante un gradiente de tiempo de 2h en contacto, se observó que, a la concentración de trabajo, la efectividad no fue buena. Como se observa, en las pruebas de superficie, de suspensión cuantitativa y de instrumentos, la efectividad del producto no fue buena a la concentración de trabajo, por lo que sugerimos continuar su estudio a otras concentraciones. Al analizar los resultados del estudio toxicológico se aprecia que el producto tiene efecto tóxico, no debe ser utilizado para la antisepsia de las manos y la piel, lo que coincide con los resultados obtenidos por diferentes autores respecto a la irritabilidad dérmica y oftálmica, entre otros efectos, que posee el producto.6
Se concluye que el producto furfural tiene efecto tóxico, no puede ser utilizado como desinfectante ni antiséptico, por lo que se decidió no continuar su estudio.

SUMMARY

    A study on the antimicrobial effectiveness of Furfural product as possible disinfectant agent was carried out. The methodology CAME was used for the evaluation. The product as an alcoholic solution in concentrations of 0.1, 0.3, and 0.5 was applied againts reference germs and a good effectiveness at 1 min was obtained. The test of skin and ophthalmic irritability yielded that the product is slightly irritant for the skin and mucosa, so it should not be used as a disinfectant agent neither for the antisepsis of the skin nor for the antisepsis of the hands.
    Subject headings: FURALDEHYDE/pharmacology; DISINFECTANTS; RABBITS; SKIN/drug effects; DRUG SCREENING; ESCHERICHIA COLI/drug effects; STAPHYLOCOCCUS AUREUS/drug effects; PSEUDOMONAS AERUGINOSA/drug effects; EFFECTIVENESS.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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  8. Instituto Nacional de Higiene, Epidemiología y Microbiología. Pruebas microbiológicas para evaluar la efectividad bactericida de un desinfectante. Normas Técnicas del Laboratorio de Desinfección, La Habana, 1986.
  9. Técnicas para el control químico de desinfectantes. Normas Técnicas del Laboratorio de Química, La Habana, 1991.
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  11. García G. Elaboración de una metodología para evaluar la irritabilidad dérmica: validación con distintos métodos. Rev Cubana Farm 1982;22(2):5.
Recibido: 21 de diciembre de 1995. Aprobado: 31 de julio de 1996.
Ing. Miriam Concepción Rojas. Instituto Nacional de Higiene, Epidemiología y Microbiología. Infanta No. 1158 entre Llinás y Clavel, Centro Habana, Ciudad de La Habana 10 300, Cuba.

1 Máster en Salud Ambiental. Investigadora Auxiliar.
2 Licenciada en Bioquímica. Aspirante a Investigadora.
3 Técnico en Microbiología.
 
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Salud Pública de México

versión impresa ISSN 0036-3634

Salud pública Méx vol.43 no.6 Cuernavaca nov./dic. 2001

 

ARTÍCULO BREVE

El cloruro de benzalconio: inaceptable para esterilizar o desinfectar instrumental médico o dental

Enrique Acosta-Gío, CD, PhD,(1) Aurelio Herrero-Farías, CD,(2) Víctor Hugo Mata-Portuguez, CD.(2)


Acosta-Gío E, Herrero-Farías A, Mata-Portuguez VH.
El cloruro de benzalconio: inaceptable para esterilizar o desinfectar instrumental médico o dental.
Salud Publica Mex 2001;43:570-573.
El texto completo en inglés de este artículo está disponible en:http://www.insp.mx/salud/index.html
Resumen Objetivo. Comparar la actividad esporicida del cloruro de benzalconio (CB) con la del glutaraldehído. Material y métodos. Estudio comparativo, hecho en el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Odontología, Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM). Se expusieron esporas de Bacillus subtilis ATCC 9372 a estos germicidas (1 espora x µl) sobre un filtro de 0.22 µm. Al completarse el tiempo de contacto, se lavaron las esporas y los filtros fueron incubados sobre agar nutritivo por 72 h a 37ºC. Resultados. El CB no eliminó las esporas de B. subtilis a la concentración de uso, ni aun al incrementar a 15 h su exposición (900 veces el tiempo recomendado). El glutaraldehído al 2% destruyó las esporas después de 10 h. La urea y el cloruro de sodio no mostraron actividad esporicida. Conclusiones. Los resultados confirman que el CB carece de actividad esporicida y ratifican que este compuesto cuaternario de amonio no tiene aplicación como agente esterilizante o como desinfectante de instrumental médico y dental. El texto completo en inglés de este artículo está disponible en:http://www.insp.mx/salud/index.html
Palabras clave: compuestos de benzalconio; esterilización; desinfectantes; México

Acosta-Gío E, Herrero-Farías A, Mata-Portuguez VH.
Benzalkonium chloride is unacceptable to sterilize or disinfect medical or dental instruments.
Salud Publica Mex 2001;43:570-573.
The English version of this paper is available at: http://www.insp.mx/salud/index.html
Abstract Objective. To compare the sporicidal activity of benzalkonium chloride (BKC) with that of glutaraldehyde.Material and Methods. A comparative study was conducted at the microbiology laboratory of Facultad de Odontología, Universidad Nacional Autónoma de México. Bacillus subtilis ATCC 9372 spores were exposed to these germicides (1 spore x mL) on a 0.22 mm filter. After completing the contact time the spores were washed and the filters were incubated on nutrient agar for 72 h at 37ºC. Results. BKC did not eliminate B. subtilisspores at the concentration used, not even after increasing contact time to 15 h (900-fold the recommended time). Two percent glutaraldehyde destroyed spores only after 10 h of contact. Urea and sodium chloride showed no sporicidal activity. Conclusions. The results confirm that BKC lacks sporicidal activity and confirm that this quaternary ammonium compound is not able to "sterilize" or "disinfect" medical and dental instruments. The English version of this paper is available at: http://www.insp.mx/salud/index.html Key words: benzalkonium compounds; sterilization; disinfectants; sporicide; germicide; Mexico


El cloruro de benzalconio (CB) es un compuesto cuaternario de amonio (CCA), cuya fórmula condensada es n-alquil metil bencil cloruro de amonio.1
El CB tiene un pésimo historial como desinfectante. Diversas bacterias gram-negativas pueden desarrollarse en CB y se asociaron infecciones nosocomiales, algunas fatales, con instrumental inmerso en CB.2-5
En 1978, la Asociación Dental Americana (ADA) eliminó a los CCA, incluso al CB, de su programa de aceptación.6Sin embargo, el CB es ampliamente empleado en América Latina.7
El cuadro I muestra algunos productos, con similares concentraciones de CB, que se anuncian indistintamente como antisépticos de uso externo, desinfectantes de instrumental en frío o esterilizantes efectivos en un minuto.8


La Organización Mundial de la Salud (OMS)9 y la Organización Panamericana de la Salud (OPS)10 emplean la terminología "esterilizante/alto-nivel, nivel intermedio, y bajo-nivel germicida". La OMS define la esterilización como la destrucción de todos los microrganismos, inclusive las esporas bacterianas.9 Un germicida esterilizante deberá destruir esporas de Bacillus subtilis y de Clostridium sporogenes.11
El propósito de este estudio, hecho en noviembre de 2000, fue evaluar la actividad esporicida del cloruro de benzalconio.

Material y métodos
El germicida Timsen (United Chemical Corp. Los Angeles CA) se empleó según las instrucciones de su etiqueta (4 g en 1 l de agua, con una concentración final de 0.16% de CB y 0.24% urea, ingrediente inerte). Otro germicida, el krit (Farmacéuticos Altamirano, México) fue empleado al 0.12 % de CB.
Como testigos se emplearon glutaraldehído al 2 % (Atosteril, A.T.O. Zizine, París), una solución de urea al 0.24 % (Sigma Chemicals. St Louis, MO) y solución salina con 140 mM de cloruro de sodio (Sigma Chemicals). Todas las soluciones se prepararon en agua bidestilada y desionizada.
Cada evaluación de la actividad esporicida se realizó por quintuplicado con 5 x 104 esporas de B. subtilis ATCC 9372 (SPS, Medical, Rush, NY) sobre un filtro de polivinilideno con límite de exclusión de 0.22 µm (Millipore Corp. Bedford, MA), según el método descrito por Collins.12 En breve, las esporas fueron suspendidas en solución salina y depositadas sobre el filtro. Entonces, la solución salina fue removida por succión y se suspendieron las esporas en 50 ml de la solución desinfectante a evaluar (1 espora x µl), durante 1, 20, 360, 600 o 900 minutos a temperatura ambiente. Al completarse el tiempo de exposición, el desinfectante fue removido y se lavaron las esporas en 5 ml de 1 % bisulfito de sodio para inactivar el glutaraldehído, seguido por enjuague en 300 ml de solución salina. Finalmente, los filtros fueron colocados, asépticamente, sobre agar nutritivo (Difco Labs, Detroit MI) e incubados por 72 h a 37ºC. Los resultados se expresaron como crecimiento o no-crecimiento.

Resultados
El cuadro II presenta los resultados de la evaluación esporicida. El CB no destruyó esporas de B. subtilis a la concentración de uso y tiempo de contacto estipulados en su etiqueta, ni al incrementar a 15 h la exposición.


El glutaraldehído al 2 % destruyó las esporas después de 10 h de contacto. La urea y la solución salina no mostraron actividad esporicida.

Discusión
Los resultados confirman que el CB carece de actividad esporicida y de propiedades esterilizantes o desinfectantes. Los desinfectantes para instrumental deben ser esporicidas. 13
Los insumos para la atención a la salud bucal deben cumplir con normas nacionales e internacionales.14 En los Estados Unidos de Norteamérica la Food and Drug Administration (FDA) regula los desinfectantes de alto nivel/esterilizantes que se emplean para reprocesar instrumental.15 La FDA no aprueba ningún CB como esterilizante o desinfectante aplicable al instrumental.
Los germicidas de bajo nivel, como el CB, pueden emplearse para limpiar superficies ambientales,1,6,10empleando vestimenta protectora, pues existe la hipersensibilidad por exposición al CB.16-18
Las etiquetas de los productos disponibles en México tienen contradicciones y deficiencias, ya que describen al CB, lo mismo como antiséptico, que como desinfectante o esterilizante. Para desinfectar, la dilución del krit es 0.12% de CB y se aplica por 5 min, mientras que para el Antibenzil es 1 % CB, y no se establece el tiempo de contacto.
Los tiempos de contacto no deben ser arbitrarios. La OPS10 y la FDA13 indican la inmersión del instrumental en líquidos esterilizantes hasta por 10 horas. El Atosteril sólo mostró actividad esporicida después de 10 h, mayor tiempo de contacto que el aceptado en Francia (6 h) para este producto.
No se evaluó el CB contra micobacterias o bacterias vegetativas asociadas con infecciones nosocomiales, comoSerratia marcensens, Staphylococcus aureus, Enterococcus sp. o Pseudomonas aeruginosa. Los CCA muestran poca o ninguna actividad contra esporas bacterianas, hongos y la mayoría de los virus,1 y no tienen actividad tuberculocida,19 por lo cual son inapropiados para la desinfección de superficies clínicas.
El CB es inadecuado, y hasta peligroso, para reprocesar instrumental.20-22 Recientemente se informó que el CB al 0.1% no es efectivo ni como enjuague bucal para reducir la acumulación de placa dentobacteriana23
La técnica de evaluación descrita por Collins,12 empleada en este estudio, es una modificación de los métodos oficiales.11 Mediante el uso de una membrana filtrante se evitan resultados falso negativos, ocasionados por la pérdida de esporas viables. El bisulfito de sodio sólo neutraliza al glutaraldehído. Se observó que al quedar CB en la membrana, por un lavado insuficiente, no hubo germinación de las esporas; este efecto bacteriostático es conocido desde hace treinta años24 y no debe ser confundido con una verdadera acción esporicida.
En esta investigación los líquidos germicidas fueron evaluados sólo en condiciones óptimas. Para su aprobación, los desinfectantes deben someterse a condiciones de peor escenario, como la presencia de contaminación orgánica e inorgánica, y bajo condiciones de uso simulado.13
La evidente ausencia de actividad esporicida del CB no requirió de confirmación con más réplicas o con C. sporogenes. Los criterios de actividad esporicida (desinfección de alto nivel germicida) sólo permiten dos fallas en 120 acarreadores. Para pasar la prueba de esterilización, no se toleran fallas.13
Para evitar el mal uso de desinfectantes, que pone en peligro vidas humanas, los lineamientos de la OMS9 y la OPS10 para la desinfección y la esterilización deben seguirse de acuerdo con los conceptos y la terminología empleada por la FDA,13,15 y por los expertos en control de infecciones.1,6,25

Referencias
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(1) Laboratorio de Microbiología y Control de Infecciones. División de Estudios de Posgrado e Investigación, Facultad de Odontología, Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM). México, D.F.
(2) Tesistas, Facultad de Odontología, UNAM. México, D.F

Fecha de recibido: 27 de noviembre de 2000 • Fecha de aprobado: 23 de mayo de 2001
Solicitud de sobretiros: Dr. Enrique Acosta-Gío, Apdo. 70 ¾ 421, Ciudad Universitaria, 04510 México, D.F., México.
Correo electrónico: acostag@servidor.unam.mx
Creative Commons License Todo el contenido de esta revista, excepto dónde está identificado, está bajo una Licencia Creative Commons
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Rev Cubana Farm v.31 n.3 Ciudad de la Habana sep.-dic. 1997

 

Productos Naturales

Instituto Nacional de Higiene Epidemiología y Microbiología

Evaluación antimicrobiana de 4 productos derivados del ácido piroleñoso para su posible utilización como desinfectantes

Miriam Concepción Rojas,1 Miriam Martínez Varona,2 Magalys Betancourt Vallejo3 y Elsa B. Martín Domínguez4
1 Master en Salud Ambiental. Investigadora Agregada. Instituto Nacional de Higiene, Epidemiología y Microbiología (INHEM).
2 Licenciada en Bioquímica. Aspirante a Investigadora. INHEM.
3 Investigadora Agregada. INHEM.
4 Licenciada en Química. Centro de Investigaciones del Petróleo.

RESUMEN

Se evaluó la efectividad antimicrobiana de 4 productos derivados del ácido piroleñoso (LQ 501-10, LQ 501-20, LQ 502-10 y LQ 502-20), según la metodología CAME. Los 4 productos tienen buena efectividad antimicrobiana a la concentración del 6 %. El estudio práctico en áreas quirúrgicas mostró una gran reducción de unidades formadoras de colonias después de la desinfección. En el estudio toxicológico se aprecia que los 4 productos son aptos para el uso propuesto. Se recomienda su utilización como desinfectantes de superficie (paredes, pisos, mesetas, etcétera), además pueden emplearse como limpiador. Los 4 productos formulados se pusieron en práctica y se incluyeron en el Registro de Productos Sanitarios.
Descriptores DeCS: EXTRACTOS VEGETALES/farmacología; ANTIBIOTICOS/farmacología; INFECCION HOSPITALARIA/quimioterapia; DESINFECTANTES/normas.
En la lucha por preservar la salud del hombre y combatir enfermedades, el empleo de desinfectantes constituye una opción obligada, su función fundamental es provocar la muerte de los organismos infecciosos causantes de distintas enfermedades.1,2 Con este fin existen en el mercado una diversidad de desinfectantes de uso práctico, en general son productos que incluyen en su composición varios ingredientes activos, que tratan de lograr una acción sinergística entre ellos, a fin de dotar al formulado de un amplio espectro de acción.3,4
En la resina de pino existen compuestos de naturaleza terpénica a los cuales se les atribuyen propiedades bactericidas; por otra parte, en el ácido piroleñoso, subproducto de la producción de carbón vegetal, hay presencia de ácidos orgánicos, fenoles y otros compuestos a los que se les reporta acción antiséptica, fungicida y bactericida entre otras.5,6
Dada la carencia de productos desinfectantes, ha sido necesario la búsqueda de alternativas, a partir de la utilización de nuevos productos que pudieran servir como sustitutos de desinfectantes de casas comerciales. En tal sentido nos trazamos como objetivo general: determinar la efectividad antimicrobiana de diferentes sustancias derivadas del ácido piroleñoso, para su posible utilización como desinfectantes; como específicos: a) elaborar los regímenes de desinfección de las sustancias que cumplan los requisitos como desinfectantes, b) evaluar la irritabilidad dérmica de los formulados, c) evaluar su eficacia como desinfectantes en condiciones prácticas.

MÉTODOS

El universo estuvo constituido por 4 formulados derivados del ácido piroleñoso provenientes del Instituto de Investigaciones de la Industria Química (LQ 501-10, LQ 501-20, LQ 502-10, LQ 502-20), a los cuales se les evaluó la actividad antimicrobiana in vitro según la metodología CAME.7
Estudio de las propiedades antimicrobianas. Se utilizaron la prueba de dilución, la prueba de suspensión cualitativa, la prueba de suspensión cuantitativa y la prueba de portagérmenes, según el Manual de Técnicas Microbiológicas del Laboratorio de Desinfección del Instiuto Nacional de Higiene, Epidemiología y Microbiología (INHEM), basada en la metodología CAME.
Estudio de algunas propiedades químicas y toxicológicas. Se emplearon la prueba de irritabilidad dérmica, segúnDraize,8 y el estudio de las propiedades químicas, según el Manual de Técnicas Químicas del Laboratorio de Desinfección del INHEM.
Elaboración de los regímenes de desinfección. Se seleccionaron la prueba de superficies y la prueba de instrumentos, según el Manual de Técnicas Microbiológicas del Laboratorio de Desinfección del INHEM.
Estudio en condiciones prácticas en áreas quirúrgicas. Se utilizaron las técnicas de frotamiento, según el Manual de Normas Técnicas del Laboratorio de Desinfección del INHEM.
Para el estudio in vivo se seleccionaron 2 áreas quirúrgicas o restringidas del Hospital Clinicoquirúrgico "Joaquín Albarrán" y 2 áreas del Hospital Pediátrico de Centro Habana.
En el análisis estadístico para la prueba de instrumento se calculó:
Mp = n - m         n
donde:
M = valor medio
p = porcentaje de descontaminación (frecuencia de aparición de los sucesos sometidos a la distribución binominal)
n = número general de determinaciones
m = cantidad de resultados negativos
En la prueba de superficies se calculó la media aritmética:
3 Xi
M = i=1           n
donde:
M = media aritmética
Xi = UFC aisladas/mL
i = determinaciones
n = número de observaciones
En el análisis estadístico del estudio práctico en hospitales se utilizó la prueba no paramétrica de Wilcoxon para muestras pareadas, con un nivel de significación de 0,05. El porcentaje de disminución de las UFC se calculó mediante la ecuación siguiente:
UFC (a) - UFC (d) x 100   UFC (a)
donde:
UFC = unidades formadoras de colonias antes de la desinfección y después de la desinfección.

RESULTADOS

En los resultados del estudio de las propiedades antimicrobianas, la prueba de dilución mostró que la dilución efectiva es 1:16, la cual corresponde a la concentración del 6 %.
En las pruebas de suspensión cualitativa y cuantitativa se obtuvo que los 4 productos al 5 % fueron efectivos entre 60 y 120 min.
Los resultados de la prueba de portagérmenes se ofrece en la tabla 1.
TABLA 1. Resultados de la prueba de portagérmenes realizada a los 4 productos en estudio
Producto Conc.(v/v)Efectividad
LQ 501-106 %A los 60 min después de aplicado para gérmenes gramnegativos y de 60-120 min para grampositivos
LQ 501-20A los 30 min después de aplicado el producto para gérmenes
LQ 502-10gramnegativos
LQ 502 206 %A los 60 min después de aplicado el producto para gérmenes grampositivos
Según el estudio de algunas propiedades químicas y toxicológicas, los 4 productos son clasificados como ligeramente irritantes (tabla 2).
TABLA 2. Resultados de la prueba de irritabilidad dérmica realizada a los 4 productos en estudio
Producto
Índice
LQ 501-10
0,96 LI
LQ 501-20
1,16 LI
LQ 502-10
0,44 LI
LQ 502-20
0,46 LI
LI: ligeramente irritante.
En relación con la elaboración de los regímenes de desinfección la mayor reducción de UFC se obtiene en las superficies de azulejos y cristal, según la prueba de superficies; además, los 4 productos mostraron buena efectividad a los 30 min de aplicados, según la prueba de desinfección de instrumentos.
En las tablas 3 y 4 se observa el porcentaje en que disminuyen las UFC después de aplicados los 4 productos en las diferentes áreas quirúrgicas.
TABLA 3. Porcentaje en que disminuyen el número de UFC por efecto de la acción de los productos en el Hospital Clinicoquirúrgico "Joaquín Albarrán"
No. de UFC
Disminución
Producto 
Antes
Después
(%)
LQ 501-20
3 459
94
97
LQ 502-20
6 076
196
96
TABLA 4. Porcentaje en que disminuye el número de UFC por efecto de los productos en el Hospital Pediátrico de Centro Habana
No. de UFC
Disminución
Producto 
Antes
Después
(%)
LQ 501-10
5 054
1 217
79
LQ 502-10
8 806
1 078
87
Los resultados de la prueba no paramétrica de Wilcoxon se presentan en la tabla 5.
TABLA 5. Resultados del análisis estadístico de las UFC
UFC
Producto 
Frecuencia
p25
p50
p75
LQ 501-20
Antes
20
50
80
Después
0
2
10
LQ 502-20
Antes
90
999*
999*
Después
4
10
20
LQ 501-10
Antes
8
87
999*
Después
0
3
5
LQ 502-10
Antes
82
999*
999*
Después
1
3
6
* Incontable.

DISCUSIÓN

A la concentración del 5 %, los 4 productos fueron efectivos a los 60 min después de aplicados para gérmenes gramnegativos y a los 120 min para grampositivos, por lo que decide aumentar la concentración a fin de disminuir el tiempo de acción. Se obtiene que la concentración del 6 %, los 4 productos tienen un comportamiento similar frente a los 3 gérmenes de referencia.
En la prueba de portagérmenes se aprecia que al 6 %, el LQ 501-10 mantiene buena efectividad a los 60 min frente a gérmenes gramnegativos y entre 60 y 120 min para grampositivos. Los 3 productos restates se mantienen efectivos para gérmenes gramnegativos a los 30 min y a los 60 min para grampositivos.
La prueba de irritabilidad dérmica en animales de experimentación arrojó que los 4 productos se encuentran dentro de los parámetros de aptitud para el uso propuesto.
Los productos LQ 501-10 y LQ 502-20 al 6 % muestran una total reducción de UFC a las 2 h de contacto, frente a las superficies de azulejos y cristal, no comportándose de igual forma las superficies plásticas y metálicas, donde la reducción fue menor.
En la prueba de instrumentos, los mejores resultados se obtienen con el LQ 501-20 y LQ 502-20 a los 60 min de contacto frente a la goma, tornillo y cristal.
Los productos LQ 501-20 y LQ 502-20 presentan una buena efectividad antimicrobiana in vivo (96 y 97 % de disminución UFC por género microbiano); sin embargo, el LQ 501-10 y el LQ 502-10 muestran una menor efectividad.
Al analizar los resultados de la prueba no paramétrica de Wilcoxon para muestras pareadas, se aprecia que hay diferencia significativa entre los datos obtenidos antes y después de la desinfección, para los percentiles 25, 50 y 75.
En conclusión, los 4 productos mantienen una buena efectividad a la concentración del 6 % frente a los gérmenes estudiados. El estudio toxicológico mostró que los 4 productos son aptos para su uso. En el estudio práctico en hospitales se aprecia una gran reducción de UFC al aplicar los productos LQ 501-20 y LQ 502-20, mientras no se comportaron de igual forma el LQ 501-10 y el LQ 502-10, los cuales presentan una aceptable efectividad antimicrobiana. Consideramos que los 4 productos estudiados pueden ser utilizados para la desinfección de superficies (pisos, paredes, mesetas, etcétera y, además, proponemos su uso como limpiador.

SUMMARY

It is evaluated the antimicrobial effectiveness of 4 products derived from the pyroligneous acid (LQ 501-10, LQ 501-20, LQ 502-10, and LQ 502-20), according to the CMEA methodology. The 4 products have a good antimicrobial efficiency at a concentration of 6 %. The practical study in surgical areas showed a great reduction of those units forming colonies after disinfection. According to the toxicological study, the 4 products are suited to their purposes. It is recommended their use as surface disinfectants (walls, floors, counters, etc.). They can also be used as cleaners. These four products were put into practice and included in the Register of Sanitary Products.
Subject headings: PLANT EXTRACTS/pharmacology; ANTIBIOTICS/pharmacology; CROSS INFECTION/drug therapy; DISINFECTANTS/standars.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

  1. Eickhoff CT. Infecciones hospitalarias. En: Hoeprich PD, ed. Tratado de enfermedades infecciosas: La Habana: 1982:27-8. (Edición Revolucionaria)
  2. Reglamento y Normas Nacionales para la prevención y control de la infección hospitalaria. Vice-Ministro de Higiene y Epidemiología. La Habana, 1984.
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  4. Rutala W. Desinfection. Sterilization and waste disposal. Prevention and control of nosocomial infections Infect Control 1987;5:149-50.
  5. TAPPI STANDAR T. 621 M/55. Composición desinfectante a partir de oleorresina de pino y ácido piroleñoso. 1992:5-6.
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  8. CAME: Metodología para seleccionar un nuevo producto como desinfectante. Norma Técnica para países miembros del CAME, Moscú, 1987.
  9. Draizer JH. Methods for the study of irritation and toxicity of substances applied topically to the skin and mucose membranes. J Pharm Exp Ther 1944;82:379-419.
Recibido: 9 de abril de 1997. Aprobado: 30 de mayo de 1997.
Ing. Miriam Concepción Rojas. Instituto Nacional de Higiene, Epidemiología y Microbiología. Infanta No. 1158, municipio Centro Habana, Ciudad de La Habana, Cuba.
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Revista Cubana de Plantas Medicinales

versión On-line ISSN 1028-4796

Rev Cubana Plant Med vol.16 no.3 Ciudad de la Habana jul.-set. 2011

 

ARTÍCULO ORIGINAL

Comparación de distintas extracciones hidroalcohólicas de plantas con indicativo etnográfico antiséptico/desinfectante
Comparison of several hydroalcoholic extracts from plants with antiseptic/disinfectant ethnographic indication
Lic. Fernanda Voigt Mota, Lic. Carolina Lambrecht Gonçalves, Dr. Luiz Filipe Damé Schuch, Dra. Helen Silveira Coimbra, MSc. Carla Hartwig
Universidad Federal de Pelotas (UFPel). Brasil.
RESUMEN
Introducción: la utilización de productos naturales y de bajo riesgo en la producción animal ha alcanzado elevada importancia en los últimos años. 
Objetivos: comparar la actividad antibacteriana de diferentes extractos hidroalcohólicos de 4 plantas (Baccharis trimera [Less] DC, Bidens pilosa L., Eucalyptus sp. y Tagetes minuta L.) frente a 2 microorganismos que causan mastitis (Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactia). 
Métodos: se obtuvieron extractos de hojas frescas con alcohol a 92,8° y de hojas secas con alcohol a 70 y 50°. La actividad antibacteriana de cada extracto se midió por la capacidad de inactivación de 105-106 UFC/mL de cada bacteria, en 3 tiempos de contacto, 30 s, 5 y 20 min. Los resultados obtenidos se hicieron por análisis de variación y comparación de las medias utilizando el ensayo de Turkey. 
Resultados: se obtuvo efecto antibacteriano con los extractos de todas las plantas. Para T. minuta, el extracto de hoja seca con alcohol de 70° fue el efecto mayor (p< 0,05), mientras que para Eucalyptus spp., se encontró que el extracto de hoja fresca resultó más eficaz, con diferencia significativa. Las otras 2 plantas no presentaron diferencia de efecto antibacteriano para las distintas formas de obtención de extracto. 
Conclusiones: hay mayor actividad antibacteriana, cuando el extracto de T. minuta es obtenido de hojas secas y en Eucalyptus spp. de hojas frescas.
Palabras clave: actividad antibacteriana, plantas medicinales, extractos hidralcohólicos, desinfectante/antiséptico.
ABSTRACT
Introduction: the use of low risk natural products in the animal production has acquired growing importance in the last few years. 
Objectives: to compare the antibacterial action of several hydroalcoholic extracts from 4 plants (Baccharis trimera[Less] DC, Bidens pilosa L., Eucalyptus sp. and Tagetes minuta L.) against 2 microorganisms causing mastitis (Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactia). 
Methods: extracts from fresh leaves using 92.8°alcohol and from dry leaves using 70° and 50° alcohol were obtained. The antibacterial action of each extract was measured on the basis of the capacity of inactivating 105-106CFU/ml of each bacterium at 3 contacting times of 30 s, 5 min and 20 min. The Turkev´s assay-based variation and comparison analysis of the means provided the final outcomes. 
Results: all the extracts had some antibacterial effect. The extract from T. minuta dry leaves using 70° alcohol showed the biggest effect (p< 0,05) whereas the extract from Eucalyptus spp. fresh leaves proved to be more effective, being the difference significant. The other 2 plants did not show any difference in terms of antibacterial effect for the various forms of obtaining the extract. 
Conclusions: the antibacterial action is greater with dry leaf extract from T. minuta and fresh leaf extract fromEucalyptus spp.
Key words: antibacterial activity, medicinal plants, hydroalcoholic extracts, disinfectant/antiseptic.
INTRODUCCIÓN
La sociedad humana siempre obtuvo de la naturaleza los recursos indispensables para su evolución, pero la exploración por los recursos naturales viene aumentando con el pasar de los años. Las plantas se tornarron más que un simple auxilio en los procesos medicinales, debido a su comprobada acción en prácticas de cura de enfermedades y en la promoción de la salud.2 Consideradas por muchos el único recurso medicinal disponible, es posible observar el cultivo de estas plantas en los comercios de regiones más desfavorecidas del país, que sirven como fitoterápico y fuente de renta de familias, comunidades y grupos.1
De esta manera, las plantas medicinales vienen siendo blancos de estudios realizados, con la intención de comprobar su potencial medicinal utilizado en la cultura de la población a través del conocimiento y la observación popular, las cuales contribuyen en la divulgación de sus beneficios.1 Estudios demuestran este potencial en aplicaciones con finalidad broncodilatadora, dérmica, ginecológica, teratogénica, antihelmíntica, hepática, anticáncer, control del colesterol y diabetes, leishmanicida, antidiarreica, fungicida, obesidad, protección contra insectos, tratamiento para quemaduras y bactericida.1-4
La medicina veterinaria tiene utilizado el conocimiento de la medicina alternativa en una tentativa de sustituir el uso de antibióticos y otros medicamentos químicos convencionales, los cuales poseen alto costo en el mercado y resultan de difícil acceso a los criadores, donde la mayoría causa efectos colaterales en el enfermo.5
Entre los problemas de salud que afectan el ganado lechero, que trae grandes perjuicios al productor, la mastitis infecciosa ocasionada por una inflamación de la glándula mamaria debido a la acción de los microorganismos patogénicos, es una de las enfermedades bovinas de mayor relevancia por la reducción en la producción de la leche, pérdidas por descarte y muertes de animales, elevados gastos en tratamientos, más allá de las consecuencias económicas para la industria de la leche por su cualidad alterada.6-8 Para la prevención de esa enfermedad, se encuentra la higienización del ambiente, de los equipamientos y la antisepsia de las tetas posordeño, lo que reduce el número de microorganismos patogénicos. El uso de extracto de plantas ha sido sugerido tanto para el tratamiento como para la desinfección de las tetas.4
Los extractos hidroalcohólicos de las hojas de Baccharis trimera (Less.) DC, Bidens pilosa L., Eucalyptus sp. yTagetes minuta L. obtenidos de la flora local ya demostraron actividad antibacteriana y antifúngica.4,9,10
Por tanto, este trabajo tiene como objetivo la comparación de diferentes maneras de obtener el extracto hidroalcohólico de hojas de B. trimera, B. pilosa, Eucalyptus sp. y T. minuta, utilizadas en estado seco y fresco en diferentes concentraciones de etanol en frente de las bacterias Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactia.
METODOS
En la realización de este trabajo se utilizaron 4 plantas con indicativo etnográfico antiséptico/desinfectante. Las hojas de las plantas se colectaron en el inicio del otoño, en una área con radio de 1 km, a partir del punto 31o 39' 13" S y 53o 03' 39' O, localizada en el municipio de Piratiní, Rio Grande del Sur, con altitud aproximada de 211 m. Cuando fue necesario, el secado se realizó en el aire, en tendederas a la sombra, protegidas de insectos y de la lluvia. Se prepararon muestras de cada planta, según Ming,11 la identificación y la conservación se hizo en el herbario del Instituto de Ciencias Biológicas de la Universidad Federal de Pelotas (UFPel). Las plantas en estudio se sometieron al proceso de extracción hidroalcohólico, según la farmacopea brasileña,12 con adaptación necesaria para la realización del experimento.
Las hojas frescas se trituraron y colocaron en alcohol etílico de cereales a 92,8° gl, en no más que 12 h poscosecha, mientras las hojas secas se extrajeron en alcohol etílico de cereales a 70 y 50°. Para la realización de los ensayos de desinfección, los extractos se sometieron a destilación, utilizando un evaporador rotativo a presión reducida. Todos los extractos después la extracción se rehidrataron al volumen inicial con agua destilada estéril, manteniendo sus concentraciones iniciales. Para el inóculo, se utilizaron Staphylococcus aureus y Streptococcusagalactiae originados a partir de la rutina de diagnósticos del Laboratorio de Enfermedades Infecciosas (LDI), Departamento de Veterinaria Preventiva, UFPel, como bacterias relacionadas a la mastitis contagiosa de los bovinos. Las bacterias se multiplicaron en agar sangre 24 h antes de la realización del experimento, resuspendidas en salina estéril, ajustadas a la escala 2 de MacFarland y diluidas 50x en salina, a fin de obtener un inóculo entre 105 y 106 UFC/mL.
Para la realización de la actividad antibacteriana de los extractos, las 2 muestras bacterianas se sometieron al contacto con las 4 soluciones desinfectantes, durante 3 intervalos de tiempo diferentes, 30 s, 5 y 20 min. Después de cada tiempo deseado, se tomóuna muestra de 0,1 mL de cada tubo, la cual fue transferida a otro tubo que contenía 0,9 mL de solución neutralizante. Después de la homogeneización, 2 alícuotas de 0,1 mL se sembraron en placas de agar BHI, y se incubaron por 24 h a 37 ºC. Para el experimento con S. agalactiae, se utilizaron placas de agar BHI adicionado de 5 % de plasma equino. Después se verificó la presencia o la ausencia de UFC, las cuales se contaron en contador con lupa. Todo el experimento se hizo en duplicado. La verificación de la esterilidad de los extractos se llevó a cabo a partir de alícuotas de 0,1 mL sembradas en placas de Petry, que contenían medio BHI e incubadas a 37 ºC por 24 h.
El resultado se expresó como índice de inhibición conforme publicado.11 La comparación de los diferentes extractos de cada planta se realizó por análisis de variación y comparación entre medias utilizando la prueba de Tukey con 95 % de significación.
RESULTADOS
Todas las plantas testadas presentaron actividad frente a las 2 bacterias en estudio. En las figuras 1, 2, 3 y 4, están presentadas las curvas de inactivación de las 2 muestras testadas con los diferentes extractos. Eucalyptusspp. no mostró diferencia estadística en cuanto a la manera de preparar el extracto (p> 0,05). A pesar de eso, el extracto obtenido de las hojas frescas resultó el único capaz de inactivar del todo el S. aureus a los 5 min.
Todos los extractos inactivaron S. agalactiae a los 30 s y S. aureus a los 20 min. En relación con la T. minuta, todos los extractos inactivaran el S. agalactiae en 30 s. Sin embargo, hubo diferencias significativas en el efecto sobre S. aureus a los 5 y a los 20 min (p< 0,05). El extracto de la hoja seca con alcohol 70° se presentó más eficiente que el extracto producido con alcohol 50° a los 5 min, y los 2 fueron mejores que el extracto de la hoja fresca en esos 2 tiempos (p< 0,05).
Para la tercera planta evaluada, B. trimera, no fueron encontradas diferencias significativas entre los diferentes extractos en ningún tiempo y para ninguna de las 2 bacterias. En los 30 s, solo el extracto de la hoja fresca no inactivó el S. agalactiae, mientras que los 3 extractos solo inactivaron el S. aureus en los 20 min. Todos los extractos de B. pilosa presentaran efecto débil y semejante sobre las 2 bacterias.
DISCUSIÓN
La actividad antibacteriana de los extractos de las plantas ha sido ampliamente demostrada. Los resultados aquí presentados confirman datos obtenidos utilizando esas mismas especies de plantas, juntadas en la misma región en años anteriores.11 Pudieran ser constatadas diferencias en la actividad antibacteriana de los diferentes extractos de T. minuta y, aunque no estadísticamente significativa, del Eucalyptus spp.
En el primero caso, la planta seca fue más activa mientras en el segundo la planta fresca presentó mejor actividad. Es sabido que los principales constituyentes antibacterianos del eucalipto son aceites volátiles que pueden perderse durante el proceso de secado, lo que explica el mejor efecto de la hoja verde.13
En cuanto a T. minuta, el resultado superior del extracto seco puede ocurrir por concentración de los componentes activos y(o) por metabolización en constituyentes más potentes durante el secado.
Esas informaciones son importantes para la utilización de estos extractos con fines antibacterianos y deben ser incorporadas enseguida al proceso de producción de los extractos para esas plantas.
Se concluye que el extracto de T. minuta producido a partir de las hojas secas con alcohol 70° y el extracto deEucalyptus spp. producido a partir de hojas frescas, a pesar de no ser estadísticamente significativo, poseen mayor actividad antibacteriana que las otras maneras de extracción testadas en este trabajo. Para B. trimera y B. pilosano se encontraron diferencias entre las maneras de extracción para la variable testada.
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12. Farmacopéia dos Estados Unidos do Brasil. 2ª ed.São Paulo (Brasil): Ed. Atheneu; 1959. p. 610.
13. Takahashi T, Kokubo R, Sakaino M. Antimicrobial activities of eucalyptus leaf extracts and flavonoids fromEucalyptus maculate. Letters Applied Microbiol. 2004;39(1):60-4.
Recibido: 15 de noviembre de 2010.
Aprobado: 26 de mayo de 2011.
Fernanda Voigt Mota. Universidade Federal de Pelotas (UFPel). Campus Universitário s/n, Capão do Leão, RS. Brasil CEP 96010-900. Correo electrónico: bitoxu@ig.com.br
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